SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH (PHẦN 7).

Peak nở rộng.

Trong quá trình phân tích HPLC, ít nhiều chúng ta đã gặp trường hợp peak của chúng ta bị nở rộng ra hai bên. Điều này nếu không được khắc phục hiệu quả sẽ làm cho chúng ta mất rất nhiều thời gian và công sức. Vậy thì chúng ta hãy cùng nhau tìm hiểu nguyên nhân gây ra hiện tượng này là gì và phòng tránh,khắc phục như thế nào.

Dưới đây là hình ảnh của 1 phổ đồ có peak nở rộng:

 

Peak có thể nở rộng tất cả các peak như hình trên hoặc đôi khi chỉ là 1 vài peak ngẫu nhiên mà thôi. Nguyên nhân chính của hiện tượng này là do: cột của chúng ta đã có tuổi và bị mất hiệu năng, cột bị tắc nghẽn, các mối nối trong hệ thống không tốt, thể tích tiêm mẫu hoặc nồng độ mẫu quá lớn. Ngoài ra khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn (protein hoặc polymer) cũng gây nên hiện tượng nở rộng peak.

Vậy thì chúng ta khắc phục như thế nào. Nhìn chung chúng ta sẽ có 2 vấn đề chính đó là do phần cứng (cột sắc ký, các mối nối,…) và do phương pháp phân tích.

Với vấn đề do cột sắc ký thì câu trả lời vẫn như các phần trước đó là tiến hành vệ sinh cột. Để phòng tránh hiện tượng này xảy ra, chúng ta luôn lựa chọn cột tốt, bảo quản cột cẩn thận ( luôn vệ sinh cột định kỳ, bảo quản đúng cách và dùng các biện pháp bảo vệ cột khỏi nhiểm bẩn).

Với vấn đề về phương pháp phân tích thì chúng ta có thể khắc phục như sau. Nếu phương pháp của chúng ta có thể tích tiêm mẫu quá cao, chúng ta có thể chỉnh lại thông số này để khác phục hiện tượng trên, cũng như mang đến kết quả phân tích tối ưu nhất.

 

Hình: Với thể tích tiêm quá cao sẽ gây ra hiện tượng peak nở rộng.

Còn khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn như các polymer, protein chúng ta cần xây dựng các phương pháp thích hợp với trang bị phần cứng chuyên dụng. Ví dụ sử dụng các loại cột phân tích chuyên dụng với bộ ổn cột và đầu dò chuyên dụng để mang lại kết quả tốt nhất. Ngoài ra, khi tiến hành phân tích các dạng protein, acid amine chúng ta có thể tiến hành sử dụng các thiết bị chuyên phân tích các chất này. Như của hãng Hitachi chúng ta có hệ thống AAA L-8900.

 

Nguyễn Hoàng Dũng – Product Manager of Hitachi-hightechnology, 2H Instrument Co.ltd Viet Nam

Tel: 0973424508 – email: dunghitman@gmail.com

Address: Toà nhà HHM, số 157-159 Xuân Hồng, Phường 12, Quận Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh.

SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH (PHẦN 6).

Peak kéo đuôi.

Đôi lúc trong quá trình phân tích sắc ký, chúng ta hay gặp các phổ đồ bị kéo đuôi. Có lúc là kéo đuôi 1 vài peak ngẫu nhiên. Đôi lúc là kéo đuôi tất cả các peak. Vậy thì nguyên nhân ở đây là gì và làm cách nào khắc phục hiện tượng đó. Chúng ta hãy cùng nhau tìm hiểu với bài viết sau đây.

Hiện tượng peak kéo đuôi đó là hiện tượng được mô tả trong hình dưới đây.

Đây là hiện tượng kéo đuôi xảy ra ở 1 vài peak ngẫu nhiên.

Đây là hiện tượng kéo đuôi xảy ra với tất cả các peak.

 

Với mỗi loại kéo đuôi như trên chúng ta có khá nhiều nguyên nhân gây ra. Tiêu biểu là các nguyên nhân sau:

• Đối với vấn đề kéo đuôi ngẫu nhiên vài peak thì nguyên nhân có thể là do cột có chất lượng không ổn định (cột không tốt hoặc cột đã dùng nhiều), hiệu ứng liên kết thứ cấp (liên kết với nhóm silanol có trên cột) hoặc do có 1peak lớn chồng lên 1 peak tạp nhỏ và tạo ra đuôi.
• Đối với vấn đề kéo đuôi tất cả các peak thì ngoài nguyên nhân chất lượng cột, chúng ta còn có thể mắc phải các lỗi sau: lượng mẫu chạy trên cột quá nhiều, có sự hình thành tạp ở đầu cột.

Nguyễn Hoàng Dũng – Product Manager of Hitachi-hightechnology, 2H Instrument Co.ltd Viet Nam

Tel: 0973424508 – email: dunghitman@gmail.com

Address: Toà nhà HHM, số 157-159 Xuân Hồng, Phường 12, Quận Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh.

Hội nghị Bruker Optic (02/07/2014) – tại Movenpick Hotel Saigon

Sáng ngày 02/07/2014, tại sảnh lớn của khách sạn 5 sao Movenpick trên đường Nguyễn Văn Trỗi đã diễn ra hội nghị giới thiệu chuyên đề Bruker Optic – NIR ứng dụng trong dược phẩm, mỹ phẩm và thực phẩm.

 

Đến dự hội nghị đã có sự góp mặt đông đảo của các đại diện phòng ban và cơ sở sản xuất dược phẩm, mỹ phẩm và thực phẩm chức năng của miền Nam.

Bàn tiếp tân được công ty 2H chuẩn bị chu đáo.

Tài liệu phát cho khách hàng.

 

Quan cảnh buổi hội thảo.

Với sự chuẩn bị chu đáo từ công ty 2H, hội thảo đã diễn ra tốt đẹp.

Trong hội nghị, chúng ta đã được các vị chuyên gia trong nước và của Bruker Optic trình bày về ứng dụng của lĩnh vực NIR trong quá trình bào chế và sản xuất đông tây dược. Bên cạnh đó, các khách tham quan còn được các chuyên gia của 2H hướng dẫn chi tiết cách lắp đặt, vận hành 2 dòng máy mới của Bruker Optic đó là dòng IR-Alpha và dòng NIR-MPA.

 

Các thành viên 2H đang chuẩn bị thiết bị để demo.

Buổi hội thảo đã kết thúc thành công tốt đẹp. Thông qua buổi hội thảo, nhiều vấn đề khúc mắc của khách hàng đã được 2H và Bruker Optic giải đáp triệt để.

SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH (PHẦN 5).

Chẻ peak do hiệu ứng dung môi.

Hiện tượng chẻ peak còn được gặp trong trường hợp sau đây. Khi tiến hành phân tích Salicylamide và Caffein trong 1 loại thuốc giảm đau ta thu nhận được phổ đồ như sau.

 

Điều kiện phân tích: Pha động: 18% ACN: 82% nước

                                               Peak 1: Caffein; Peak 2: Salicylamide

Khi mà thay đổi dung môi trong mẫu bằng chính pha động thì hiện tượng chẻ peak biến mất.

 

Điều này chứng tỏ rằng nếu dung môi xử lý mẫu có độ phân cực thấp hơn pha động sẽ gây làm cho peak của mẫu bị bè và chẻ peak. Giải thích cho hiện tượng này, chúng ta hãy hình dung như sau: Khi chúng ta dùng dung môi có độ phân cực thấp hơn, đầu tiên dung môi hiển nhiên có liên kết với hợp chất cần phân tích bên cạnh đó cột sẽ hình thành liên kết giữ dung môi lại (điều tương tự cũng xảy ra với pha động nhưng mà liên kết ở pha động thấp hơn dung môi – do độ phân cực pha động cao hơn dung môi). Điều này làm cho peak của mẫu phân tích bị bè rộng và đôi khi là bị chẻ peak.

Để khắc phục tình trạng này chúng ta nên tiến hành chọn dung môi có độ phân cực cao hơn hoặc bằng pha động (hay nhiều bài báo ghi rằng nồng độ chất hữu cơ ít hơn). Kết quả là chúng ta thu được phổ như hình bên dưới.

Chú ý rằng tùy vào loại cột mà chúng ta nên đọc tài liệu liên quan và tiến hành chọn dung môi thích hợp.

 

Nguyễn Hoàng Dũng – Product Manager of Hitachi-hightechnology, 2H Instrument Co.ltd Viet Nam

Tel: 0973424508 – email: dunghitman@gmail.com

Address: Toà nhà HHM, số 157-159 Xuân Hồng, Phường 12, Quận Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh.

SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH.

Những vấn đề về hình dạng của peak (mũi tín hiệu) – tiếp theo.

Chẻ peak do cột bị nhiễm bẩn:

Đôi khi, trong quá trình phân tích bạn phải chạy số lượng mẫu quá nhiều và điều đó làm cho cột sắc ký của bạn bị nhiễm bẩn gây nên hiện tượng chẻ peak. Như hiện tượng dưới đây: khi tiến hành chạy tạp trong của APAP trong 1 loại thuốc cảm, người ta thu được phổ đồ như sau:

Với trường hợp chạy quá nhiều mẫu và bị chẻ peak như vậy, chúng ta nên tiến hành kiểm tra các bước sau đây. Thứ nhất là kiểm tra lại bảo vệ cột của chúng ta có bị bẩn hay không, vệ sinh bảo vệ cột. Kế đến nếu hiện tượng vẫn tiếp diễn thì chúng ta nên vệ sinh luôn cột sắc ký của mình (như trình bày ở phần trước).

Chú ý: để hạn chế trường vấn đề này xảy ra, khi các bạn chạy sắc ký quá nhiều mẫu, bạn nên chỉnh thời gian chạy mỗi mẫu dài ra hơn. Hành động này có mục đích là rữa giải cột nhiều hơn trong quá trình chạy mẫu và hạn chế việc cột bị nhiễm bẫn. Ngoài ra chúng ta cũng cần nghiên cứu lại phương pháp xử lý mẫu để giảm thiếu hiện tượng cột bị nhiễm bẩn.

Nguyễn Hoàng Dũng – Product Manager of Hitachi-hightechnology, 2H Instrument Co.ltd Viet Nam

Tel: 0973424508 – email: dunghitman@gmail.com

Address: Toà nhà HHM, số 157-159 Xuân Hồng, Phường 12, Quận Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh.